17级的学弟们到了选择专业的时候了！因此我写了这样几篇推文（预期是5篇，加上今天2篇，已经发了4篇了），简单介绍几个心内科的研究热点，希望能吸引更多的学弟投身心内（对没错，就是这么直接）。
今天分享的是如上这篇文章。文章提到人类诱导的多能干细胞（hiPSCs）是一种很有前途的心肌细胞（CMs）、平滑肌细胞（SMCs）和内皮细胞（ECs）的来源，可用于心肌再生治疗。由于：①细胞保留率和植入率较低，②对这些细胞在肿瘤发生和室性心律失常中的潜在作用的担忧，③以细胞为基础的产品也比传统的治疗剂更难储存和运输，这项技术的临床应用一直受到限制，研究人员把目光投向外泌体。比如，由悬浮在水凝胶中的人诱导多能干细胞来源的心脏细胞（hiPSC-CMs）外泌体组成的贴片应用于梗死大鼠心脏表面，可以改善心功能、梗死面积、肥厚、CMs凋亡和心律失常。来自不同类型的hiPSC衍生的心肌细胞的外泌体的保护和再生特性是否不同还有待确定，特别是在大型动物的实验。
可能读正文部分比较枯燥，不过还是推荐读一下“总结讨论”部分（序号为04），了解目前该领域的一些研究展望。此外，最后还附上了外泌体染色方法整理。
01作者首先对所需用到的材料的特征进行了鉴定
（一）hiPSC衍生细胞的特征。
（1）hiPSCs被重编程以表达GFP。分化开始后第8天出现典型的收缩，收缩细胞数在第12天达到高峰。
（2）hiPSC-CMs标志物：α-肌节肌动蛋白、cTnT、cTnI。还检测到20%~30%的hiPSC-CMs表达心室肌球蛋白轻链2（仅存在于心室CMS中），相邻细胞间普遍存在缝隙连接蛋白Cx43。
（3）hiPSC-ECs的标志物：CD31、血管内皮钙粘素和血管性血友病因子（即vWF）。
（4）hiPSC-SMCs的标志物：α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Calponin1和肌球蛋白重链11（MYH11）。
（5）流式细胞术检测了上述2~4的标志物（cTnI、CD31、MYH11），鉴定了细胞纯度。
（二）hiPSC衍生细胞外泌体的特征。
作者按2：1：1比例的hiPSC-CMs：hiPSC-ECs：hiPSC-SMCs培养液经离心超滤和聚乙二醇沉淀，获取外泌体。之所以选择这一比例，是因为作者之前的研究表明含有2：1：1比例的这三种细胞的人心肌贴片（hCMP）可以促进猪心肌损伤的恢复，并且从hCMP培养液中收集的外体可以促进培养的CMs的细胞周期活性、增殖和对缺氧诱导的细胞*性的抵抗力，以及培养的ECs的血管生成活性。
（1）形态与结构。纳米颗粒追踪技术和透射电子显微镜观察直径为~98nm，具有双层膜的结构。
（2）表面蛋白/标志物。蛋白质阵列检测证实存在外泌体特异性标记（ALG-2相互作用蛋白X、肿瘤易感基因蛋白、CD81、CD63、Flotillin-1、细胞间粘附分子、内皮细胞粘附分子和膜联蛋白A5)，并且不存在细胞膜蛋白GM。
（3）被细胞摄取能力。用PKH26标记的外泌体培养hiPSC-CMs，荧光成像证实被细胞摄取。当hPSC-CMs与绿色荧光染料PKH67标记的外切体一起培养，并用碘化丙啶（PI）染色以清除死亡细胞时，流式细胞术分析证实98%以上的活细胞也呈PKH67荧光阳性。
（三）外泌体miR序列特征。
用生物分析仪分析分别从各细胞及混合细胞的外泌体中提取的总RNA，并在IlluminaHiSeq上测定miRNAs的序列（关于此测序技术，